蘇州市分子診斷試劑原材料供應商
發(fā)布時間：2024-06-09 01:13:47
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常規(guī)普通PCR常見問題：1. 優(yōu)化反應條件，梯度摸索退火溫度，延長退火延伸時間，增加反應循環(huán)數（30-45區(qū)間為宜）。2. 對核酸模板進行純化，或使用商業(yè)化核酸提取試劑盒進行提取，增加核酸模板的上樣量。3. 優(yōu)化反應體系（預混體系除外），改變檢測體系中的Mg2+濃度及dNTPs用量，更換體系中Buffer。4. 重新設計引物，避免引物二聚體和鏈內二級結構，在一次稀釋引物后可分裝成多支小管，減少反復凍融次數。
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化驗室診斷方法采用的檢測依據有以下幾種:①國家標準以及農業(yè)標準;②動物疫病檢測的其他規(guī)范:③化驗室自行設定的檢測方法。不管采用何種方法，都需要考慮化驗室自身的條件及樣品類型，如在對偽狂犬病進行診斷時，實驗室有酶標儀，沒有基因擴增儀，在診斷時檢測人員可采用酶聯免疫吸附試驗進行診斷。如果送檢樣品為血清，檢測人員則可以采用酶聯吸附試驗，而不需要采用動物接種試驗與病毒分離鑒定方法。
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人們生活水平不斷提升,對食品質量安 全提出更高的要求,檢疫工作不斷深入與完善,僅依靠感觀檢查已遠不能滿足當今工作的需要,須使病理化驗室發(fā)揮的作用.為更好地配合產地檢疫,屠宰檢疫及農貿市場的肉食品檢疫,根據《動物防疫法》,《食品衛(wèi)生法》,《定點屠宰管理辦法》及相關法律法規(guī)的精神,結合實際工作需要,高度重視動物的防疫工作.而動物疫病的診斷離不開先進的技術和設備,該文主要圍繞動物疫病診斷化驗室操作中常見的問題進行分析.
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全球，雖然只有少數的芯片可用于臨床診斷，但國內基因芯片技術已經處于世界領 跑的地位。基因芯片技術將是熒光定量PCR 檢測技術具挑戰(zhàn)的潛在對手，主要是：熒光定量PCR 技術一次只能檢測一個或幾個目標基因，而基因芯片技術可以實現對大量目標基因的同時檢測。隨著人類基因組計劃的進展，基因芯片在國內外已成為研發(fā)熱點。若基因芯片技術迅速成熟并大規(guī)模產業(yè)化，將對熒光定量PCR 檢測產生較大的沖擊。不過，基因芯片的大規(guī)模臨床應用還存在尚未克服的技術缺陷，主要是由于芯片診斷特異性和靈敏度低、芯片診斷成本高昂和芯片診斷配套儀器價格昂貴等原因，預計熒光定量PCR 檢測技術在今后5 到10 年內可保持前鋒。
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分子診斷的主要技術有核酸分子雜交、聚合酶鏈反應和生物芯片技術。1.核酸分子雜交技術 具有一定互補序列和核苷酸單鏈在液相或固相中按堿基互補配對原則締合成異質雙鏈的過程，稱為核酸分子雜交。雜交的雙方是待測核酸序列和探針序列。應用該技術可對特定DNA或RNA序列進行定性或定量檢測。2.聚合酶鏈反應（即Polymerase chain reaction，PCR）原理：PCR是模板DNA，引物和四種脫氧核糖核昔三磷酸（dNTP）在DNA聚合酶作用下發(fā)生酶促聚合反應，擴增出所需目的DNA。包括三個基本步驟：雙鏈DNA模板加熱變性成單鏈（變性）；在低溫下引物與單鏈DNA互補配對（退火）；在適宜溫度下TapDNA聚合酶催化引物沿著模板DNA延伸。3.生物芯片技術是近年發(fā)展起來的分子生物學與微電子技術相結合的核酸分析檢測技術。起初的生物芯片技術主要目標是用于DNA序列測定、基因表達譜鑒定和基因突變體檢測和分析，所以又稱為DNA芯片或基因芯片技術。由于這一技術已擴展至免疫反應、受體結合等非核酸領域，出現了蛋白質芯片、免疫芯片、細胞芯片、組織芯片等，所以改稱生物芯片技術更符合發(fā)展趨勢。